自誘導(dǎo)TB培養(yǎng)基Terrific Broth

Autoinductive Terrific Broth產(chǎn)品基本信息

產(chǎn)品描述：

自動(dòng)誘導(dǎo)超級(jí)肉湯(Autoinductive Terrific Broth)也稱自動(dòng)誘導(dǎo)TB培養(yǎng)基，用于Lac啟動(dòng)子驅(qū)動(dòng)的大腸桿菌重組蛋白表達(dá)，無需添加IPTG。自誘導(dǎo)TB培養(yǎng)基能夠獲得高細(xì)胞密度，蛋白表達(dá)率高出IPTG誘導(dǎo)過程好幾倍。

工作原理：

Terrific Broth 由LB培養(yǎng)基改進(jìn)而來，目的是獲得高密度細(xì)胞。E. coli在該培養(yǎng)基中生長速度快于其在LB培養(yǎng)基或 2x YT肉湯中的生長速度。使用TB培養(yǎng)基還可以獲得高產(chǎn)量質(zhì)粒DNA和重組蛋白。

通常，外源蛋白在細(xì)菌中表達(dá)時(shí)常使用IPTG誘導(dǎo)的啟動(dòng)子，如Lac啟動(dòng)子。當(dāng)細(xì)胞密度達(dá)到理想值時(shí)，通過向培養(yǎng)基中加入IPTG的方法誘導(dǎo)蛋白表達(dá)。使用這個(gè)自動(dòng)誘導(dǎo)培養(yǎng)基，不再需要監(jiān)測(cè)細(xì)胞密度和添加IPTG。葡萄糖作為半乳糖操縱子的阻遏因子阻止細(xì)菌利用α-乳糖，而被優(yōu)先代謝，促進(jìn)高密度生長。一旦培養(yǎng)基中的葡萄糖被耗盡（通常發(fā)生在對(duì)數(shù)期的后期），乳糖被?-半乳糖苷酶轉(zhuǎn)換成異乳糖（葡萄糖-1,6-半乳糖），而后者作為IPTG誘導(dǎo)型啟動(dòng)子的誘導(dǎo)劑，引起乳糖阻遏子從與DNA結(jié)合的位點(diǎn)上釋放，啟動(dòng)重組蛋白的表達(dá)。對(duì)于DE3基因型的E.coli中，異乳糖使T7lac啟動(dòng)子去阻遏，并誘導(dǎo)lacUV5啟動(dòng)子表達(dá)T7 RNA聚合酶。通過這種方式，在細(xì)菌培養(yǎng)物生長到某一特定點(diǎn)時(shí)蛋白表達(dá)自發(fā)開始，去掉了監(jiān)測(cè)細(xì)胞密度（OD600）和添加IPTG這兩個(gè)步驟。與傳統(tǒng)IPTG誘導(dǎo)的蛋白表達(dá)過程相比，使用自動(dòng)誘導(dǎo)培養(yǎng)基極大地方便和簡(jiǎn)化了試驗(yàn)流程。另外還便于多克隆分析，如藍(lán)白斑篩選。

該培養(yǎng)基中含有理想比例的葡萄糖和α-乳糖作為碳源和能量來源。胰蛋白胨提供氮源、維生素、礦物質(zhì)和氨基酸，這些營養(yǎng)成分是細(xì)胞生長所必需的。酵母提取物是豐富的B族維生素來源。Studier salts為細(xì)菌細(xì)胞的生長提供最佳的生理環(huán)境。

配方與配制方法

1. 稱取55.55g 脫水培養(yǎng)基粉末，用1L去離子水加熱溶解。
2. 煮沸1min。
3. 115°C 滅菌20min。

不要過度加熱，避免乳糖分解和培養(yǎng)基顏色加深。冷卻后保存在2-8oC，如果不染菌，可以保存2個(gè)月左右。