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肝臟巨噬細(xì)胞等細(xì)胞群免疫分析和細(xì)胞清除方案

更新時(shí)間:2022-11-06   點(diǎn)擊次數(shù):2216次

肝臟是一個(gè)復(fù)雜的器官,由多種細(xì)胞類(lèi)型組成。 其中大部分(60-80%)是實(shí)質(zhì)細(xì)胞——肝細(xì)胞。 其余細(xì)胞形成異質(zhì)的非實(shí)質(zhì)細(xì)胞 (NPC) 群,主要由肝內(nèi)皮細(xì)胞 (LEC)、巨噬細(xì)胞(KF),肝星狀細(xì)胞 (HSC) 和免疫細(xì)胞組成。 肝內(nèi)免疫細(xì)胞是 NPC 突出的成分(高達(dá) 50%),由 T 細(xì)胞(CD8+ 和 CD4+)、B 細(xì)胞、自然殺傷 (NK) 和自然殺傷T (NKT) 細(xì)胞、中性粒細(xì)胞、單核細(xì)胞和樹(shù)突狀細(xì)胞 (DC) 和巨噬細(xì)胞的各種亞型組成。 肝臟免疫細(xì)胞的相對(duì)組成因生理?xiàng)l件和物種而異,例如,小鼠肝臟中的 NKT 細(xì)胞比人類(lèi)多。 肝臟免疫細(xì)胞組成不同于淋巴器官或血液,因?yàn)楦闻K富含 CD4+ T 細(xì)胞、NK、NKT 和 γ δ (γδ) T 細(xì)胞。細(xì)胞比例分布參考如下圖。

肝臟細(xì)胞分布比例.jpg


一般來(lái)說(shuō),肝臟主要是致耐受性器官,對(duì)于預(yù)防對(duì)飲食和腸道菌群的炎癥反應(yīng)很重要。 因此,NPC 積極促進(jìn)免疫耐受,例如,肝細(xì)胞、枯否細(xì)胞 (KC) 和 LEC 誘導(dǎo) T 細(xì)胞無(wú)反應(yīng)。 此外,肝竇LEC (LSEC) 產(chǎn)生稱(chēng)為 LSECtin 的凝集素,可觸發(fā) CD8+ T 細(xì)胞耐受。 此外,KC 分泌抗炎細(xì)胞因子白細(xì)胞介素 10 (IL10) ,肝臟駐留的 NK 細(xì)胞可通過(guò)與免疫檢查點(diǎn)通路的相互作用抑制 T 細(xì)胞。 在某些病理?xiàng)l件下,例如感染、炎癥性疾病或癌癥,肝臟免疫細(xì)胞的分布或功能可能會(huì)發(fā)生變化。 這可能導(dǎo)致潛在的不平衡和免疫細(xì)胞串?dāng)_的改變。

Schematic-representation-of-liver-cell-populations-In-addition-to-the-parenchymal.png

為了更好地了解影響肝臟的各種病理,需要對(duì)常駐/浸潤(rùn)性免疫群體進(jìn)行分離、免疫表型分析和量化。 目標(biāo)是獲得高產(chǎn)量的單細(xì)胞懸液,同時(shí)仍保留抗原/表位譜(最小表位降解)并為后續(xù)下游應(yīng)用保留細(xì)胞活力。為了避免存在于血液中免疫亞群中的肝臟交叉污染,肝臟的原位灌注是通過(guò)腔靜脈或門(mén)靜脈進(jìn)行的。 另一個(gè)關(guān)鍵步驟是正確處理肝組織。 組織解離可以通過(guò)機(jī)械破壞、使用膠原酶的酶消化或兩種方法的組合來(lái)進(jìn)行。 對(duì)于肝臟免疫細(xì)胞表型分析,需要從獲得的勻漿中去除肝細(xì)胞,因?yàn)樗鼈兛赡軙?huì)干擾以后的下游免疫分析。 可以通過(guò)多個(gè)離心步驟或通過(guò) Percoll 或 Iodixanol 密度梯度進(jìn)一步純化細(xì)胞懸液。 然而,這個(gè)過(guò)程既費(fèi)時(shí)又費(fèi)材料。 此外,純化方法的苛刻條件也可能影響用于任何下游應(yīng)用的細(xì)胞的活力和/或功能。

小鼠肝臟灌注方案:

(A) 揭開(kāi)和拉伸門(mén)靜脈以進(jìn)行灌注。 (B) 肝灌注。 (C) 漸進(jìn)式灌注肝臟。 (D) 解離的材料準(zhǔn)備。 帶有細(xì)胞培養(yǎng)基的 C 管,含解離肝臟的酶。 (E) 肝臟與解離混合物一起放入 C 管中。 (F) 解離后的肝臟勻漿。 (G) 分離組織的濾液。 (H) 基于密度梯度的細(xì)胞純化(細(xì)胞懸液頂部的碎片去除溶液層;離心前)。 (I) 獲得的細(xì)胞被殘留的紅細(xì)胞污染。 (J) 去除紅細(xì)胞后的最終NPC。

肝臟灌注.png

小鼠肝臟流式檢測(cè)Marker方案:

小鼠肝臟巨噬細(xì)胞清除方案:

LIPOSOMA的ClodronateLiposomes氯膦酸鹽二鈉脂質(zhì)體(貨號(hào):CP-005-005)清除肝臟巨噬細(xì)胞,頻頻見(jiàn)于Cell,Nature和Science。詳細(xì)文獻(xiàn)可以聯(lián)系靶點(diǎn)科技技術(shù)支持索取全文。清除單核巨噬細(xì)胞是研究巨噬細(xì)胞體內(nèi)功能的重要工具。

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