懸浮細(xì)胞做好免疫熒光的方法Protocol和創(chuàng)新

根據(jù)細(xì)胞培養(yǎng)時(shí)是否附著在支持介質(zhì)上，分為貼壁細(xì)胞和懸浮細(xì)胞。

貼壁細(xì)胞天生容易貼壁，這為后續(xù)實(shí)驗(yàn)提供了便利條件。

但是懸浮細(xì)胞在培養(yǎng)基中懸浮生長(zhǎng)，如何像貼壁細(xì)胞一樣好操作，一直是大家的夢(mèng)想。

一 傳統(tǒng)的方法：細(xì)胞準(zhǔn)備與固定

（1）單層生長(zhǎng)細(xì)胞：取對(duì)數(shù)生長(zhǎng)細(xì)胞，用0.25％胰蛋白酶消化，制成單細(xì)胞懸液。將細(xì)胞接種到預(yù)先放置幾張6×22mm蓋玻片的培養(yǎng)瓶或培養(yǎng)皿中，置二氧化碳培養(yǎng)箱培養(yǎng)1-3天，待細(xì)胞接近長(zhǎng)成單層，取出蓋玻片，進(jìn)入PBS（0.01 mol/L,pH7.4）洗2次，然后根據(jù)實(shí)驗(yàn)?zāi)康?，選擇適當(dāng)固定劑固定細(xì)胞。常用固定劑有：95％乙醇（固定時(shí)間10-30min），丙酮（5－10min）等。

（2) 懸浮生長(zhǎng)細(xì)胞：取對(duì)數(shù)生長(zhǎng)細(xì)胞，用PBS離心洗滌（1000rpm，5min）2次，或用細(xì)胞離心甩片機(jī)制備細(xì)胞片或直接制備細(xì)胞涂片，把細(xì)胞片浸入95％乙醇或丙酮中固定。

2 將已經(jīng)固定的細(xì)胞玻片放入蓋片染色缸，用PBS振洗5min，取出吹干。

3 滴加適當(dāng)稀釋的特異性抗體，置于濕盒內(nèi)，37度保溫30－60min或度冰箱過(guò)夜

4 PBS振洗3次，每次5min，吹干。

5 滴加適當(dāng)稀釋的熒光素標(biāo)記抗體，置于濕盒內(nèi)，37度保溫30－60min。

6 PBS振洗2次，每次5min，然后用蒸餾水振洗1次。

7 50％緩沖甘油封片。

二 Shi-Fix玻片最新方法

Shi-Fix玻片，可以讓我們像貼壁細(xì)胞一樣對(duì)懸浮細(xì)胞做免疫熒光，如下是使用Shi-Fix做的實(shí)驗(yàn)結(jié)果。簡(jiǎn)單的四部，告別傳統(tǒng)的自己涂片，自己甩片，自己烤片等作坊式方法。