Hypoxyprobe產(chǎn)品Pimonidazole使用注意事項

Pimonidazole是新型的組織細(xì)胞缺氧標(biāo)記物，Hypoxyprobe（HPI）公司擁有硝基咪唑類化合物特異性抗體，該抗體為公司專有技術(shù)，在此基礎(chǔ)上Hypoxyprobe公司開發(fā)了不同標(biāo)記的特異性抗體，可用于：利用免疫組織化學(xué)，酶聯(lián)免疫吸附試驗和流式細(xì)胞儀技術(shù)分析對腫瘤細(xì)胞分析檢測。

Pimonidazole使用注意事項

1. Animal Studies 動物研究

研究正常或腫瘤組織缺氧首先通過靜脈注射（intravenous infusion）、腹腔注射（intraperitoneal injection）或口服（oral ingestion）法給Hypoxyprobe-1溶液，劑量為60mg/kg體重。比如，25g小鼠的探針用量為1.5mg/只小鼠。（高達(dá)400mg/kg的劑量用于小鼠無可見毒性或引起組織缺氧變化，但60mg/kg以成本給予良好的染色結(jié)果）。

給藥后，Hypoxyprobe-1分布到包括大腦的所有組織，且僅僅在氧濃度≤14μM（相當(dāng)于pO2=10mm Hg，37℃）的細(xì)胞內(nèi)與蛋白質(zhì)巰基形成加合物。除了腫瘤之外，正常組織如肝臟、腎臟和皮膚含pO2等于或低于10mm Hg的細(xì)胞，也會結(jié)合Hypoxyprobe-1。

2.Tissue cultures 組織培養(yǎng)

通常情況下，細(xì)胞懸液置于含100-200μM Hypoxyprobe-1的缺氧環(huán)境中孵育1-2h。之后細(xì)胞離心涂片、固定、FTIC-MAb1和anti-FITC chromogenic secondary染色。

常見問題解答（FAO）

1.Hypoxyprobe-1 探針如何溶解？

Pimonidazole HCl 是弱堿性鹽酸鹽，水溶性非常好，一般建議溶解于116mg/ml 的中性生理鹽水。

2.Pimonidazole HCl劑量是多少？

對于常規(guī)的小動物大小比較均一的，例如：小鼠或大鼠，我們推薦：探針用量：60 mg/kg。從30 mg/kg 到 400 mg/kg在小鼠和大鼠都有用到，在此范圍內(nèi)的探針用量，不會由于血流效應(yīng)而導(dǎo)致毒性或氧量的改變。對于體型較大個體，注射劑量依據(jù)個體的基礎(chǔ)表面積而定。對于人樣本，推薦劑量為：0.5 mg/m²，狗樣本：0.28 mg/m²

3.Pimonidazole HCl 探針是否能夠滲透進(jìn)入低氧大腦組織或腦腫瘤組織？

Pimonidazole HCl可以自由滲透進(jìn)入腦和腦腫瘤組織。

4.探針注射后，多久可以進(jìn)行收獲組織？

對于人體組織的一些研究表明，收獲組織需要在免疫后15-24小時后檢查。探針在血漿中的半衰期是5小時，因此16-24小時相當(dāng)于3-5個探針半衰期循環(huán)。也就是說：在組織檢查時：大概有1/8 到1/32 的探針仍存在，冷固定后，這樣減少了非特異性染色，且低背景。

另外關(guān)于人類腫瘤研究表明，活組織檢查應(yīng)該在免疫后，1.5-4小時，然后組織及時轉(zhuǎn)到液氮固定。這種方法背景也較低。小鼠血漿中的探針半衰期在0.25小時。這種情況下，采取1-2小時收獲組織然后采取快速固定方法，可有效的消除背景。