單核巨噬細胞包括骨髓中的前單核細胞、外周血中的單核細胞、以及組織內(nèi)的巨噬細胞(Mφ)。Mφ來源于血液中的單核細胞,而單核細胞又來源于骨髓中的前體細胞。
操作方法:
?。?)分離單核細胞,用Hanks液(pH7.2)調(diào)整為2~3×105細胞/ml;
(2)將趨化因子液25μl加入趨化小室的下室。將濾膜光澤的一面朝向趨化因子蓋在孔上,并將濾膜左上方剪去一小角;
(3)蓋上趨化小室的上室部分,用固定器夾緊;
?。?)將單核細胞懸液50μl注入上室。操作時不能產(chǎn)生氣泡,因氣泡妨礙細胞的移動;
?。?)各孔注入單核細胞懸液后,蓋以25mm×80mm的載玻片,覆蓋全部孔。在37℃,5%CO2溫箱中靜置90min誘導細胞趨化移動;
?。?)從溫箱中取出多孔趨化小室;松開固定器,將小室上、下倒置放在預先準備好的紙墊上,取下濾膜;
?。?)將事先切下一角的濾膜一邊用大鋏子固定,另一側(cè)用小鋏子夾好;
?。?)將朝向單核細胞的濾膜面(即無光澤面朝下)浸入生理鹽水盤內(nèi),將大鋏子一邊的濾膜從液體中輕輕拉起(與容器呈30o角),即可將未移動的細胞從濾膜上洗脫下來;
?。?)將濾膜光澤面朝上,貼在事先涂有蛋清甘油(甘油與蛋清等量混合而成)的載玻片(40mm×80mm)上,冷風吹干濾膜后,用甲醇固定,進行Giemsa或瑞氏染色;
單核巨噬細胞的副作用:
1、對本品過敏者禁用。有過敏傾向者,慎用。
2、發(fā)熱、骨痛、肌痛、頭痛、腹瀉、無力及皮疹等,亦偶有心律失常及呼吸困難等。
3、在化療和放療前后24小時內(nèi),不可使用本品。
4、本品可能是骨髓惡性腫瘤生長因子,具有骨髓特征的惡性腫瘤病人應慎用。
5、定期進行白細胞分類計數(shù),當白細胞>50×109/L,中性粒細胞計數(shù)>20×109/L時應停藥。
6、肝、腎功能不全、體液潴留者慎用。