巨噬細(xì)胞清除各種方法對比-仍以Clodronate Liposomes為主

巨噬細(xì)胞（Macrophages）是先天性免疫系統(tǒng)的重要組成細(xì)胞之一，作為機(jī)體第一道防線，具有促進(jìn)損傷愈合、產(chǎn)生活性氧物質(zhì)和吞噬異物的作用，其功能異常可引起機(jī)體免疫反應(yīng)失調(diào)或組織病理性損傷。巨噬細(xì)胞有組織駐留型和非組織駐留型（招募）兩種細(xì)胞群體。巨噬細(xì)胞的另一特征是能夠表達(dá)特定的細(xì)胞表面標(biāo)志物如F4/80、CD68、iNOS和CD206等。非組織駐留的巨噬細(xì)胞主要分布于循環(huán)系統(tǒng)內(nèi)，而駐留型巨噬細(xì)胞則主要存在于各個(gè)組織器官中，如神經(jīng)系統(tǒng)的小膠質(zhì)細(xì)胞、肝臟Kupffer細(xì)胞、皮膚朗格漢斯細(xì)胞和腹腔的巨噬細(xì)胞等。巨噬細(xì)胞的分化、增殖和極化依賴于特定的生長因子及其受體。巨噬細(xì)胞的表型受到其周圍微環(huán)境的影響，目前已鑒定出兩類極化表型的巨噬細(xì)胞：M1和M2表型細(xì)胞。M1表型細(xì)胞，也被稱為經(jīng)典激活的巨噬細(xì)胞，表達(dá)iNOS，釋放促炎細(xì)胞因子，如TNFα、IL-1b、IL-6和IL-12；而M2型巨噬細(xì)胞，即交替激活的巨噬細(xì)胞，表達(dá)CD206和Arg-1，負(fù)責(zé)釋放抗炎細(xì)胞因子，如IL-10。M1和M2巨噬細(xì)胞更多是體外用于簡化研究的誘導(dǎo)模型狀態(tài)。對于體內(nèi)，更多是兩種狀態(tài)或者混合的多種狀態(tài)。這正是巨噬細(xì)胞作為損失和修復(fù)，為維持穩(wěn)態(tài)的功能體現(xiàn)。

巨噬細(xì)胞表型與功能活性的這種多樣性和復(fù)雜性，使得巨噬細(xì)胞的體內(nèi)生物學(xué)研究存在一定困難。為解決這一問題，近年采用了一種稱為巨噬細(xì)胞耗竭的方法來進(jìn)行研究。巨噬細(xì)胞耗竭實(shí)際上是一種采用理化或遺傳學(xué)技術(shù)將巨噬細(xì)胞去除的方法。這種方法現(xiàn)已廣泛用于研究巨噬細(xì)胞在動(dòng)物疾病模型中的作用和免疫病理或炎癥損傷機(jī)制，也開始用于某些疾病模型如移植排異、腸腫瘤和心功能不全等的治療研究。

近年應(yīng)用較多的幾種巨噬細(xì)胞耗竭方法。

1.氯膦酸二鈉脂質(zhì)體法：Clodronate Liposomes。以荷蘭Lipsoma的產(chǎn)品頻頻見于Cell，Nature和Science，貨號CP-005-005. 國內(nèi)客戶可以聯(lián)系靶點(diǎn)科技，便于開國內(nèi)可以報(bào)銷的發(fā)票。目前是應(yīng)用被廣泛認(rèn)可，文獻(xiàn)數(shù)以萬計(jì)的清除方法。建議優(yōu)先考慮。

2.GdCl3化合物法：已經(jīng)一種淘汰的方法。主要抑制巨噬細(xì)胞的吞噬活性。GdCl3對結(jié)腸黏膜巨噬細(xì)胞無明顯的耗竭作用。很多部位，包括骨髓等組織，缺乏文獻(xiàn)。

3.CSF-1/CSF-1R為靶點(diǎn)的抗體方法：巨噬細(xì)胞的產(chǎn)生、增殖和存活依賴于CSF-1，并在其細(xì)胞表面高水平表達(dá)CSF-1R(CD115)。CSF-1能夠通過CSF-1R酪氨酸激酶的自身磷酸化和隨后下游分子的磷酸化來發(fā)揮其生物學(xué)功能。因此，以CSF-1/CSF-1R為靶點(diǎn)的方法也成為巨噬細(xì)胞耗竭的一種重要手段?？贵w法效率低（40%），成本高。

4.轉(zhuǎn)基因小鼠法：缺點(diǎn)不用說，一是小鼠不好獲得，二是繁殖時(shí)間長，三是成本高，四是小鼠背景需要考慮。基于白喉毒素受體(DTR)的轉(zhuǎn)基因小鼠是目前應(yīng)用比較多的，用于巨噬細(xì)胞耗竭的轉(zhuǎn)基因模型。

盡管有這么多種方法，然而巨噬細(xì)胞清除中仍然存在一些問題，比如，巨噬細(xì)胞清除效率難以量化（造尤其模，巨噬細(xì)胞的量是變化的，動(dòng)態(tài)變化的）、清除的亞型難以確定、清除對象不具有特異性即可能會損傷除巨噬細(xì)胞外的其他免疫及非免疫細(xì)胞。荷蘭LIPOSOMA的氯膦酸鹽脂質(zhì)體法作為當(dāng)前應(yīng)用最為廣泛的巨噬細(xì)胞清除方法，具有經(jīng)濟(jì)、制備簡單的優(yōu)點(diǎn)，但其對不同部位的巨噬細(xì)胞清除效率差異很大(通常50%~95%)，不同研究組的研究結(jié)果的可靠性有待評估。目前，巨噬細(xì)胞清除作為一種建立模型的方法被應(yīng)用于大量的實(shí)驗(yàn)研究，幾乎所有的方法都有其缺陷，以至于很多相似的實(shí)驗(yàn)得出不同的實(shí)驗(yàn)結(jié)果。實(shí)驗(yàn)結(jié)果的不嚴(yán)謹(jǐn)一方面是未選擇符合自身實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)的耗竭方法，另一方面是巨噬細(xì)胞耗竭方法本身就具有很多局限性，例如，Csf-1r基因敲除模型中CSF-1R除了能夠在巨噬細(xì)胞表達(dá)，還能在樹突狀細(xì)胞和單核細(xì)胞表達(dá)]。如果不能排除其他免疫細(xì)胞對實(shí)驗(yàn)的影響，該方法則不具有嚴(yán)謹(jǐn)性。轉(zhuǎn)基因模型能夠基于細(xì)胞特異的基因設(shè)計(jì)靶向特定巨噬細(xì)胞亞型的方案，具有耗竭效率高以及耗竭特異性強(qiáng)的優(yōu)勢，然而轉(zhuǎn)基因小鼠價(jià)格昂貴及繁育周期長是實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)需要考慮的重要影響因素。因此，綜合考慮，推薦使用國際認(rèn)可品牌的產(chǎn)品。畢竟經(jīng)過國內(nèi)國外大量文獻(xiàn)的驗(yàn)證，可靠的質(zhì)量為減少自己實(shí)驗(yàn)的不確定性少一個(gè)因素。